一、课题背景
风疹病毒（Rubellavirus,RV）是披膜病毒科风疹病毒属的唯一成员，人是其唯一的自然宿主。风疹本身并不严重，但RV对公众健康最大的威胁是它的致畸性。孕妇感染RV可对婴儿产生先天性损害，尤其是妊娠前3个月如感染RV，病毒可经血侵犯胎儿，导致自发流产、死产或胎儿感染，从而引起严重的出生缺陷，包括白内障、耳聋、心脏病或智力低下，即为先天性风疹综合征(Congenitalrubellasyndromes,CRS)。虽然风疹病毒通过疫苗接种是可以预防的，但一旦感染临床上无特效治疗，因此在临床上对风疹病毒的感染、实验室诊断及其流行特征极为重视。现行的疫苗为减毒活疫苗，虽免疫效果较好，但是活疫苗的RNA有感染性，有回复突变的可能，而且，Hofmann等证实风疹疫苗病毒可通过胎盘导致胎儿感染，有潜在的致畸危险性，同时该疫苗与成年妇女的慢性关节炎和儿童孤独症有关。因此对RV的研究仍具有一定的意义，尤其是包膜糖蛋白E1，因为E1是最重要的免疫原，所以对RV免疫学和基因工程疫苗的研究主要是针对E1蛋白，目前已经有报道在昆虫细胞和哺乳动物细胞中表达了RV E1糖蛋白，并对其免疫学活性做了初步的研究。
我国已在许多城市开展了RV感染的筛查，检测RV的方法主要包括：病毒分离，PCR技术，电镜技术，核酸分子杂交，环介导等温扩增技术以及ELISA法。ELISA是目前诊断RV感染的常规方法,其灵敏度与特异度较高。目前，国内应用的RV抗原均为细胞培养的病毒抗原，存在制备过程繁琐、抗原成分不均一、稳定性较差、有明显的批次差别等问题，使这一抗原的敏感性及特异性均不尽如人意。故近年来国外已开始研究制备RV的基因工程抗原以用于RV的血清学检测，应用基因重组技术生产RV重组抗原在抗原的制备及抗原纯度、稳定性等方面较传统抗原均有较大优势，显示了良好的应用前景。
二、研究方法和技术路线
在RV的3种主要结构蛋白E1,E2和C蛋白中，抗原表位主要存在于E1膜蛋白上。E1为包膜糖蛋白，与E2共同构成病毒包膜的刺突。E1相对分子质量为57000，由412-418个氨基酸残基组成。应用单克隆抗体已确定E1上存在血凝以及中和抗原决定簇。国外已有E1膜蛋白的全长基因表达，但完整的E1膜蛋白水溶性差，不易纯化，难以作为抗原用于RV病毒感染的血清学检测。E1膜蛋白中大多抗原数抗原决定簇聚集区位于201-305位氨基酸之间，并且这一抗原决定簇集区序列高度保守。因此，本文设计中选取E1的212-214位氨基酸片段基因序列作为目的基因构建表达克隆，以期获得最佳重组RV抗原。
本课题利用高表达巨细胞病毒抗原的工程菌，建立纯化表达蛋白的纯化工艺，获得可溶性高纯度蛋白。对纯化的蛋白进行SDS-PAGE纯度分析及ELISA等抗原性分析。
技术路线：
1.构建表达工程菌
将重组的质粒转移到制成感受态细胞的宿主细胞中，构建并鉴定工程菌
2.纯化表达的蛋白
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