乳酸杆菌的培养特性研究文献综述

 2022-12-24 13:50:53

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

  1. 研究背景

乳酸菌是一种发酵糖类并产生乳酸的菌，乳酸杆菌为其中的一种，它通常在人体的口腔、胃肠以及生殖道等环境中存在。乳酸杆菌细胞形态多样，大小为 (0.5-1.2) mu;mtimes;(1.0-10.0) mu;m。观察为长或细长杆状弯曲形短杆状及棒形球杆状，通常成短链。乳酸杆菌发酵葡萄糖有两种发酵类型：同质发酵又称正型乳酸发酵（仅产生乳酸）及异质发酵又称异型乳酸发酵（产生乳酸、乙酸、甲酸、琥珀酸）。而乳酸杆菌在一定数量下，能够对宿主健康产生例如调节免疫功能，改善疾病等有益作用。

  1. 研究目的

本课题计划通过生化鉴定实验考察不同乳酸杆菌菌株的培养生长特性，以达到通过控制生长条件特异调节某种或某些乳酸杆菌的目的，为实现人为精准调控人肠道微生物组中特异菌种提供理论基础。

  1. 研究方法
    1. 菌株鉴定
      1. 革兰氏染色：乳酸杆菌染色结果应当为紫色（革兰氏阳性细菌）杆状；
      2. 16S rDNA测序：对细菌的16S rDNA基因序列进行特异扩增和测序，以GenBank和EMBL基因库数据为参照，鉴定乳杆菌的种类。
    2. 生长条件实验
      1. 耐盐性实验

取乳酸杆菌24h培养物 (OD600＝0.50plusmn;0.01)，按10%接种量接种在不同NaCl浓度梯度的MRS肉汤培养基中，培养24h后以OD平均值为纵坐标，以NaCl摩尔浓度为横坐标，绘制NaCl耐受性曲线。

      1. 耐酸碱实验

取乳酸杆菌24h培养物 (OD600＝0.50plusmn;0.01)，按10%接种量接种在不同pH梯度MRS肉汤培养基中，培养24h后以平均OD值为纵坐标，以pH为横坐标绘制耐酸性曲线图。

      1. 耐高温实验

取乳酸杆菌24h培养物 (OD600＝0.50plusmn;0.01)，按10%接种量接种在MRS肉汤培养基中，培养24h后，分别置于不同温度梯度水浴中处理后，涂布MRS琼脂平板，计数、统计细菌的菌落数并计算出存活率。以存活率为纵坐标，以温度为横坐标，绘制耐热曲线。

    1. 生化鉴定实验
      1. 靛基质（吲哚）试验

将实验菌接种于Dunham氏蛋白胨半固体培养基中，置37℃培养24~48h，观察显色现象。

      1. 甲基红（MR）试验

将实验菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置37℃培养48~72h，加甲基红试剂观察结果。

      1. 乙酰甲基甲醇V-P实验

接种新鲜的实验菌种于葡萄糖蛋白胨水培养基中, 培养2天后，加入KOH肌酐溶液，猛烈摇振混合，观察结果。

      1. 柠檬酸盐试验

将实验菌少量穿刺接种到Simmons氏斜面培养基中，培养2~4d，观察培养基颜色变化。

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