抗VEGFR-2抗体抗肿瘤机制与药效学研究文献综述

 2023-01-31 22:28:12

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一研究的内容

越来越多的研究表明，良性肿瘤血管生成稀少，血管生成缓慢，而大多数恶性肿瘤血管生成密集且生长迅速，因此肿瘤的抗血管生成治疗正在成为肿瘤综合治疗中的一项重要内容，其与放疗和化疗相比有以下优点：1血管靶向明确；2肿瘤细胞不易生成耐药性；3肿瘤血管内皮细胞的有限损伤就可以造成大量肿瘤细胞的生长抑制；4肿瘤血管新生与肿瘤转移的发生密切相关。

实验所用抗体为本实验室自行设计、制备的全人源抗VEGFR-2抗体（Mab-04），其通过与内皮细胞表面表达的VEGFR-2结合，阻断VEGF/VEGFR-2信号传导通路，抑制肿瘤血管的生成，进而达到抗肿瘤的目的。本实验的主要目的为探究Mab-04的抗肿瘤机制并进一步对其体内、外药效进行研究。本课题计划进行以下实验研究Mab-04的抗肿瘤活性，包括MTT法检测抗体对细胞增殖的抑制作用、流式细胞术(flowcytometryassay)检测抗体与细胞表面抗原VEGFR-2的结合丰度、transwell侵袭实验检测抗体对细胞侵袭及转移的影响、WesternBlotting研究信号通路、鸡胚尿囊膜模型(ChickEmbryoChorioallantoicMembranemodel,CAM)、动物移植瘤模型(Animalmodeloftransplantingtumors)研究抗体的体内抗肿瘤活性。

二采用的研究手段

（1）MTT法：用于检测Mab-04对内皮细胞及各肿瘤细胞的增殖抑制率。制备单细胞悬液后，铺于96孔板中，过夜培养后加入不同浓度的Mab-04，继续培养72h后加MTT，再培养4h后加DMSO显色，酶标仪上检测吸光度值，计算得到半数抑制率，即Mab-04的IC50值。

（2）流式细胞分析法：检测抗体与细胞表面抗原结合的亲和力。将抗体Mab-04与细胞作用一段时间后，加入能结合Mab-04的带有FITC荧光标签的抗体，最后在流式细胞仪上检测荧光的强度，从而判断抗体与内皮细胞的亲和力。

（3）Transwell侵袭：第一天将Matrigel胶于4℃冰上过夜，使之融化，第二天将Matrigel胶按比例稀释后加入小室中，37℃培养箱中凝固3-4h。以无血清培养基制备单细胞悬液后，加入已铺胶的小室中，分组，每组加入不同浓度的抗体，每个浓度设置两个复孔，同时设置空白组和阳性对照组。最后，将transwell小室转移至含完全培养液的孔中，然后置于37℃、5%CO2培养箱中培养20h左右。最后，小室经固定和染色后，使用OLYMPUS倒置显微镜进行观察和拍照，每个小室选择5个固定的位置拍照，用Photoshop软件对每个区域内的细胞进行计数，取5个区域的平均值计算药物对内皮细胞的侵袭抑制率。

（4）鸡胚尿囊绒毛膜实验：鸡胚买来后用温水和消毒液清洗，晾干，于普通培养箱中培养，每日检查胚胎发育情况，识别胚胎发育的标志特征，在照卵灯下标记鸡头及气室位置。孵育第6~7天种蛋，用牙科钻砂轮在蛋壳表面划刻出凹痕,轻轻揭去凹陷处蛋皮,撕掉内壳膜,此时该处CAM下陷,形成假气室。用透明胶带纸封贴假气室,形成透明观察窗,可供观察和加药操作。然后开窗暴露CAM，暴露CAM后,将事先制备的定性滤纸置于CAM中央血管稀少区,以便待测药物充分发挥作用。按分组用微量加样器滴加相应药物，然后用透明胶带帖封贴气室端，形成透明观察窗，观察鸡胚的存活情况。封窗后继续孵育。一般加药后继续培养3天。最后在解剖显微镜下观察鸡胚尿囊膜新生血管情况。

（5）动物移植瘤模型实验

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