开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
拟研究或解决的问题：
研究MTDH在CML耐药中的作用以及基因沉默后CML的细胞生物学行为，从而为寻找白血病治疗新靶点提供借鉴意义。
文献综述：
慢性粒细胞白血病（CML）是一种常见的血液系统恶性肿瘤，发病率约占白血病的20%。CML 一线治疗药物甲磺酸伊马替尼（imatinib mesylate）可特异性抑制该病治疗靶Bcr-Abl酪氨酸激酶活性，恢复骨髓正常造血。但在临床中发现该药在初治患者中出现10~25%原发血液病耐药、15%原发细胞遗传学耐药，在加速期和急变期的继发性耐药率分别为73%和95%。肿瘤耐药问题已经成为当前CML治疗中关注的焦点。
针对CML治疗中出现的耐药问题，第二代和第三代更强的激酶抑制剂相继被研发成功并已进入临床使用中。但是这些药物仍未有效解决CML耐药问题，如尼洛替尼和达沙替尼相继出现了耐药性，而疗效最好的普纳替尼由于能引起致命性血凝块和严重血管狭窄的风险，也于2013年10月在美国停止使用。因此，仅针对靶点Bcr-Abl治疗或许并不能有效克服CML中的耐药问题，需进一步寻找白血病治疗全新靶点。
临床研究显示，MTDH是目前唯一一个在所有癌症组织中都过表达的蛋白，表达程度与癌症进程及病人预后密切相关；并且参与癌症发生发展的几乎所有重要过程。因此，MTDH很可能作为一个关键的原癌基因，促进癌症的发生和发展。 Metadherin（MTDH，亦名astrocyte elevated gene-1/AEG-1 或 Lyric）是2002年发现的一种新型原癌基因。人类MTDH基因位于染色体8q22.1，由12个外显子和11个内含子组成，MTDH mRNA全长为7667bp，编码的蛋白由582个氨基酸组成，分子量为64kDa，等电点为9.33。但目前关于MTDH在CML耐药中的作用机制研究尚未见报道。
采用的研究手段：
我们假设用RNA干扰技术破坏MTDH-mRNA,使MTDH蛋白的合成处在极低的水平,降低MTDH蛋白及对下游基因的转录调控,能够在很大程度上阻断肿瘤细胞的MTDH的表达,从而观察由此对肿瘤细胞的细胞生物学行为的影响。
在本研究中,首先采用Western-Blot分析深入了解MTDH在CML亲本细胞K562敏感株的表达情况;在此基础上采用RNAi的方式建立MTDH基因稳定沉默的细胞株,证明其MTDH基因沉默的效果;通过与其亲本细胞的比较,观察阻断MTDH蛋白对细胞增殖、细胞周期、凋亡、侵袭和化疗敏感性的影响,分析AEG一1在肿瘤细胞增殖、凋亡、细胞周期、侵袭和化疗敏感性中所起的作用,为临床应用奠定基础,也为进一步寻找白血病全新靶点提供借鉴意义。
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
与Southern Blot或Northern Blot杂交方法类似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
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