anginex融合蛋白的原核表达,复性及初步活性测定文献综述

 2023-01-09 17:15:30

研究目的:anginex为一种合成的小分子多肽,可能用于治疗肿瘤。

因其化学合成成本高,且分子量小导致体内半衰期短,限制了anginex的应用。

本课题拟采用融合表达的方法,获得重组的anginex融合蛋白,以降低其生产成本;并由融合蛋白提高anginex产物的分子量,以延长其体内半衰期。

本课题主要对融合蛋白的表达、纯化、复性及生物活性进行初步研究。

研究内容:在大肠杆菌的宿主中对anginex融合蛋白进行诱导表达;优化anginex融合蛋白的表达条件;anginex融合蛋白复性方法的研究;初步观察融合蛋白的生物活性。

研究手段:SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达;优化宿主菌种、诱导剂浓度、温度、时间等蛋白表达条件;层析等方法纯化目的蛋白;尝试不同复性方法对目的蛋白进行复性;体外细胞毒性实验初步测定蛋白质活性。

工作进度:2015.3.2 -2015.3.15了解原核表达、蛋白质复性、蛋白质活性检测等实验技术;查阅本课题相关文献;2015.3.16-2015.3.30 在大肠杆菌不同菌株,观察重组anginex融合蛋白的表达,了解其表达水平及表达性质;2015.3.31-2015.4.15 对宿主菌、诱导时机、诱导时间、诱导剂浓度等表达条件进行优化;2015.4.16-2015.4.30 大量表达和收取目的蛋白,进行纯化及复性的尝试,以获取活性目的蛋白;2015.5.1 -2015.5.15 对目的蛋白进行细胞毒性实验,初步检测生物活性;2015.5.16-2015.5.30 总结实验数据,撰写毕业论文。

文献综述:一种抑制肿瘤血管生成的小分子多肽anginexAnginex是利用碱性折叠原理人工设计的一种新的小分子多肽,由来自PF-4、IL-8和BP1三种细胞因子中的beta;片层域短序列相结合而组成,它能够有效地抑制血管生成和肿瘤的生长。

在体外实验中检测对血管内皮细胞的增殖抑制作用,显示IL-8、PF-4和BP1肽在高浓度时没有明显的抑制作用,而anginex在低浓度时已有明显的抑制作用。

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