开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
背景与目的:
肿瘤侵袭和转移是指肿瘤细胞脱离原发生长部位,通过各种途径的转运,在机体内远离原发部位的器官组织继续增殖生长,形成同样性质转移瘤的过程,是癌症患者死亡的主要原因之一。肿瘤转移是一个多步骤,多因素参与的极其复杂的过程,在肿瘤侵袭转移过程中,由于肿瘤细胞要多次穿越基底膜并侵入周围组织,因此对细胞外基质(ECM)的降解是肿瘤侵袭转移的关键步骤之一。在这个环节中许多蛋白酶发挥了很重要的作用,促进了细胞的侵袭转移,其中基质金属蛋白酶家族(MMPs)在肿瘤细胞的侵袭转移过程中发挥了尤为关键的作用。另外,肿瘤细胞对ECM的黏附也在其中起到十分重要的作用,抑制这一过程可以有效的治疗和预防肿瘤转移,而整合素(Integrin)作为一种跨膜信号分子,通过特有的信号转导途径传递相关信号,从而改变细胞骨架,引起细胞形态,黏附功能的改变。
VI-14是新合成的黄酮类衍生物,已有文献报道VI-14能够体外抑制人乳腺癌细胞的侵袭转移,但是VI-14通过对Integrin/FAK信号通路来影响肝癌细胞的侵袭转移还尚未见报道。本课题拟利用体外经典药效学实验来考察VI-14是否对肝癌细胞运动侵袭有抑制作用,并初步研究其机制,考察VI-14对Integrin/FAK信号通路的影响。
研究手段:
1.MTT实验
实验原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使MTT还原成沉积在细胞中的蓝紫色结晶,用DMSO将其溶解并在酶标仪上检测其OD值。
2.划痕修复实验
使用吸管末端、注射器针头或电流来划伤融合生长的单层细胞,伤痕的愈合过程通过显微拍摄或实时显微摄像进行检测监视。测量创伤边界的缩窄速率和对迁移经过初始创伤边界的细胞进行计数,从而对细胞迁移进行量化表征。
3.细胞侵袭实验
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