开题报告内容：
去氧鬼臼毒素（deoxypodophyllotoxin DPT）是从中药桃儿七Sinopodophyllum emodi(wall)中提取，分离，纯化而得到的一种化学物质。从上个世纪90年代就有实验报道，DPT对人白血病P-388，人肺癌A-549及结肠癌HT-29细胞株具有体外增殖抑制作用，其中VP-16，VM-26和etopohos等已经在临床应用，并取得了不错的成效。有关学者也对其药理活性进行了进一步研究。目前，临床上应用的DPT类药物包括：鬼臼毒素酊，鬼臼毒素软膏等。但是，关于DPT对胃癌的抗肿瘤作用国内几乎没有报道。
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率有着明显的地域分布特点，2/3的病例分布在发展中国家，尤以中国及东南亚国家高发。目前，在世界范围内，胃癌的发病率有着明显下降趋势，但是死亡率下降并不明显，胃癌死亡率仍居恶性肿瘤第二位。除手术治疗外，有效的药物治疗已经成为综合治疗胃癌的热点。DPT作用靶点为细胞微管蛋白（tubulin）。微管蛋白是球形分子, 有两种类型:alpha;微管蛋白(alpha;-tubulin)和beta;微管蛋白(beta;-tubulin), 两种微管蛋白具有相似的三维结构, 能够紧密地结合成二聚体, 作为微管组装的亚基。alpha;亚基由450个氨基酸组成, beta;亚基是由455个氨基酸组成, 它们的分子量约55kDa。这两种亚基有35～40%的氨基酸序列同源, 表明编码它们的基因可能是由同一原始祖先演变而来。如今市面上流通着很多作用于微管蛋白的药物。长春碱类药物的作用机制是通过阻滞微蛋白聚合和诱导微管解聚,从而使细胞分裂停止有丝分裂中期,常见的药物有长春花碱,长春新碱,长春地辛等。紫杉烷类如紫杉醇,多西他赛的作用机制是促进微管蛋白聚合成团块和成束并使其稳定,从而抑制微管网的正常重组,阻碍细胞有丝分裂；泰素帝的机制是加快微管蛋白装配成微管的速率和延长微管长度,加强微管蛋白聚合和抑制微管解聚,形成稳定的非功能性微管束,抑制肿瘤细胞的分裂和增殖。
CCK-8试剂可用于进行简单而准确的细胞增殖和细胞毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8，其结构式为：（2-（2-甲氧基-4-硝基苯）-2-（4-硝基苯）-5-（2，4-二硫苯）-2H-四唑，一钠盐）。它在电子载体（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的细胞脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜物。能溶解于细胞组织培养基中，在细胞脱氢反应中所产生的甲臜物数量与活细胞的数量呈正比。由于CCK-8试剂中已预先混合好进行细胞增殖和细胞毒性测试所需的组分。无需再用缓冲液或者培养基进行稀释；同时，CCK-8试剂无需任何放射性同位素和有机溶剂。在细胞增殖分析和细胞毒性分析中检测活细胞数量采用CCK-8试剂可做灵敏的闭塞分析。其增殖实验步骤一般为四步：1、 接种细胞悬液于96孔板内，预先置于37℃，5% CO 2饱和湿度培养箱内培养。2、在每个孔内加入10mu;l的CCK-8试剂。3、把培养板放在培养箱内培养1-4小时。4、在450nm波长处测定吸光度，参比波长为600nm或600nm以上。
其次，我们将SGC-7901细胞接种于裸小鼠皮下。由于裸小鼠先天性无胸腺,细胞免疫力低下 ,不能执行正常T细胞免疫，人源肿瘤细胞可以在裸小鼠体内生长成瘤。然后对接种裸小鼠进行DPT尾静脉给药，与阴性对照组和阳性对照组相比较，观察药物的肿瘤的体内增殖抑制作用。
本课题拟计划通过以上两种实验手段，初步评价去氧鬼臼毒素对胃癌的治疗效果，为后续的作用机制研究及临床试验做准备。
参考文献
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[3] Yeonjoong Yong,Soon Young Shin,Young Han Lee.Yoongho Ljm .Antitumor activity of deoxypodophyllotoxin isolated from Anthriscus sylvestris: Induction of G2/M cell cycle arrest and caspase-dependent apoptosis. Bioorganic Medicinal Chemistry Letters
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