开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、课题背景:
原代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大,是检测药物很好的实验对象,原代细胞进行实验的优点是:细胞直接来源于机体组织,生物性状尚未发生大的变化,在一定程度上能够反映体内的状态,如原代细胞的受体、信号传导信号系统、蛋白质生物学特征、RNA生物学特征、DNA生物学和遗传学特征、对外界反应、对毒理和致畸反应、对个体化药物治疗、对药物筛选等都能够正确反映体内的生理和病理状态,原代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上一样,是检测判断、药物治疗最好的实验对象。
胃炎是种常见的胃粘膜炎症的统称,可分为急性和慢性两类。慢性胃炎(chronicgastritis)是由各种病因引起的胃黏膜慢性炎症,而小鼠原代腹腔巨噬细胞是炎症反应的中心细胞,也是慢性炎症的主要细胞。它与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大,可感受少量LPS的存在,激活机体免疫系统,促进多种缺氧及炎症相关基因的表达。同时小鼠腹腔巨噬细胞是不增殖的细胞,除了正常的凋亡,细胞不会增殖。是检测药物很好的实验对象。
炎症介质是炎症过程中形成或释放、并参与炎症反应的活性物质。
IL-6是典型的具有炎症介导活性的细胞因子,是炎症起始阶段的一个重要致炎因子。机体感染病原体后在炎症的急性期,血液中的IL-6升高,若IL-6水平过高或持续时间太长则会对机体产生不利的影响。目前有研究证明,IL-6水平增高较之常规的C反应蛋白要更早出现,是最早出现的感染指标。但是IL-6在正常组织及炎症组织中均有,伴有Hp感染的胃炎中较多,但与胃炎活动程度无关,可能其具有抗炎作用,在Hp感染的炎症中起一定的保护作用。
NO-双向调节作用,具有促炎和抗炎的双重特性,其对胃粘膜既有保护作用,又有杀伤毒性与促炎作用。NO正常分泌可以调节胃肠道平滑肌的正常舒张收缩,调节胃肠粘膜血流量,维持粘膜完整性和防御功能,少量的NO可调节胃粘膜微循环和粘液的分泌,保护胃粘膜;在感染炎症等病理状态下,炎症细胞产物可激活诱导型一氧化氮合成酶表达,合成大量的NO,NO过度生成,影响细胞周期的调控和细胞增殖,细胞毒性加重,可促进溃疡的发生。低浓度的NO可活化细胞内信号转导通路,最终活化NF-kappa;B,产生适量的炎症介质,维持机体正常的防御功能;高浓度的NO抑制NF-kappa;B活化,减少IL-6、IL-8等炎症细胞因子的生成;NO减少会导致粘膜损伤加重。
本实验主要拟通过体外细胞实验研究待测药物的抗炎活性,采用脂多糖诱导的小鼠原代腹腔巨噬细胞炎症模型,测定NO含量及IL-6的变化及细胞活力,进行初步的抗炎活性筛选,为后续进一步的药物相关制剂研究提供活性依据。
二、拟研究或解决的问题
1.小鼠腹腔巨噬细胞是慢性炎症的主要细胞,通过文献考察及试验筛选确定适宜的造模剂及相应的剂量,即确定细胞炎症模型;
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