一、课题解决的问题1. 设计并构建CYP264B1-RhfRed在大肠杆菌中异源表达的全细胞催化系统。
2. 以睾酮为发酵底物，分离所有氧化产物，并解析结构。
3. 探究不同电子传递成分是否对睾酮氧化的区域选择性和立体选择性有明显作用。
二、采用的研究手段1. 运用PCR技术扩增特殊的基因片段2. 同源重组构建所需的特殊质粒，转化到大肠杆菌中进行大量发酵3. 产物经液质联用分析是否出现氧化产物，并比较不同质粒的氧化产物是否有区别4. 硅胶柱层析初步分离氧化产物5. 制备型高效液相色谱仪纯化分离氧化产物6. 核磁共振技术解析产物结构三、工作安排进展2月1日-2月29日：查阅文献，确定选题；3月1日-3月15日：确定实验方案，填写开题报告；3月16日-5月20日：完成相关实验内容，处理实验数据；5月21日-5月29日：完成毕业论文撰写；5月30日-6月10日：完成毕业论文审评，毕业论文答辩。
四、文献综述细胞色素氧化酶CYP264B1源于粘细菌Sorangium cellulosum，是一种细胞色素P450单加氧酶，经氧化还原蛋白参与电子传递，完成对倍半萜的氧化作用[1]。
同时P450酶在类固醇的代谢中起到了关键作用，尤其是对睾酮的羟基化作用，已经被广泛地应用于人类肝微粒体P450酶的研究中。
例如，人体肝脏和小肠中含量最丰富的P450酶CYP3A4，可以催化睾酮10个不同位点的单羟基化[2]。
当被单独的P450酶催化时，睾酮羟基化具有明显的区域选择性，因此睾酮羟基化模式可被用作特殊探针来研究P450酶的存在和特征[3]。
1，细胞色素P450单加氧酶细胞色素P450单加氧酶是一类广泛分布于自然界的血红素-硫醇盐蛋白超家族[4], P450超家族保持着一个非常保守的3D折叠结构，绝对保守的半胱氨酸轴向连接到血红素假体基团，并且拥有一个共同的用于底物氧化的催化循环，生成包括铁氧阳离子自由基和铁氢过氧化物在内的高活性物质[5]。
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