课题名称:淫羊藿苷对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响一、研究目的与意义:糖尿病肾病(DN)是以肾脏微血管病变作为最主要表现的糖尿病并发症,也是造成慢性肾衰的主要病因,发病机制尚不清楚。
研究发现细胞凋亡参与糖尿病肾病发病的机制。
肾小管上皮细胞作为肾脏的主要组成部分,在肾小管病变中扮演重要角色,其活化状态变化可能是一个不容忽视的疾病转折点,细胞增殖与凋亡在肾小管上皮细胞活化状态改变中是常见的生物学进程,然而增殖与凋亡并不一定是对立的,肾小管上皮细胞活化后增殖与凋亡的变化尚不确切,因此研究其活化过程中增殖和凋亡的改变对于调控肾小管上皮细胞活化,甚至是糖尿病肾病发生发展过程都极具研究意义。
淫羊藿苷具有肾脏保护功能,但其对肾小管上皮细胞增殖与凋亡的影响尚不清楚,因此,通过研究淫羊藿苷对高糖诱导的肾小管上皮细胞的增殖与凋亡的影响,将有助于进一步了解淫羊藿苷保护肾脏的可能机制,完善淫羊藿苷的临床应用。
二、研究内容:本课题体外培养人肾小管上皮HK-2 细胞,高糖刺激后,再用淫羊藿苷干预,观察人肾小管上皮HK-2 细胞增殖力、凋亡率以及Caspase-3 和Caspase-7 蛋白表达的改变三、实验试剂及仪器:人肾小管上皮细胞、淫羊藿苷、RPMI-1640培养基、胎牛血清、四氮甲基唑蓝( MTT)、Annexin V/PI凋亡检测试剂盒、流式细胞仪、生物洁净工作台、CO2细胞恒温培养箱等仪器四、实验步骤:1、3.1-3.31 开题报告撰写2、4.1-5.31 实验开展:培养细胞,高糖刺激,再用淫羊藿苷干预高糖浓度筛选MTT 比色分析法评估细胞活力Annexin V /PI 标记流式细胞仪检测细胞凋亡Western blot 检测蛋白表达统计分析五、主要成果形式:完成毕业论文一篇六、综述:随着人们生活习惯的改变,如高脂饮食、运动减少等,近年来糖尿病(DM)发病率逐年升高,糖尿病肾病是糖尿病晚期的并发症之一,同时也是导致糖尿病患者死亡的主要原因[1]。
肾小管上皮细胞(HK-2)是肾小管的主要组成部分,肾小管上皮细胞受损将会严重影响肾小管的Na 转运功能、葡萄糖吸收功能等[2]。
因此,肾小管上皮细胞在糖尿病肾病的发生发展中承担着重要作用。
研究表明[3-4]高糖可以通过多条通路促进肾小管上皮细胞发生上皮间质转化,造成其纤维化。
同时,高糖会影响细胞凋亡信号转导的多个阶段,在大多数研究的细胞类型中,葡萄糖会通过增加氧化应激和亚硝化应激,激活促凋亡Bcl-2家族蛋白并启动半胱天冬酶级联反应而导致细胞死亡[5]。
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