开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
- 立题背景及研究现状
1. 蛋白质药物及基因工程的发展现状及前景
1.1 蛋白质类药物的发展前景
蛋白质类药物因为其活性比较高,特异性比较强,价格低廉,安全性比较好,成功率较高受到了医药相关研究人士的青睐,经过几十年的发展已经取得了成果。目前已经有近百种重组蛋白药物上市,几千种药物处于研发之中。现在重组蛋白质类药物已经用于治疗人类疾病,如重组人EPO突变体和重组人胰岛素的突变体PEG化的L-天冬酰胺酶、PEG化的IFNalpha;2b、PEG化的IFNalpha;2a还有PEG化的G—CSF[1]。
1.2 基因工程在重组蛋白中的应用
基因工程近来在生命领域得到了广泛的应用,基因工程从出现到发展到现在近30年,不管是在理论研究方面,还是在实际生产应用方面,都已经取得了很大的进步,从各个方面都在影响人们的生活。基因工程的步骤主要有:先从某些生物细胞中获取我们要的目的基因,或在人工控制下合成目的DNA片段,并与载体在体外进行重组;然后将重组的DNA转化到受体的活细胞中去,从而改变受体细胞的遗传特性[2]。
将基因导入质粒,构建重组表达载体,导入受体细胞,经过表达,诱导,纯化来得到我们想要的目的产物[3]。基因工程重组蛋白能从基因水平进行改造,可以定向改变,从而得到我们想要的蛋白。关于基因工程所使用的术语也还没有很好地统一,遗传工程、基因操作、重组DNA技术、基因克隆都可用来表示基因工程。
1.3 目前比较常用的纯化蛋白的技术
现在利用基因工程得到的重组蛋白越来越影响我们的生活,所以如何将我们所要的重组蛋白提取出来就显得非常重要,而想用一种方法将蛋白质分离出来则太过于理想化,我们需要根据所需重组蛋白的理化性质制定出一整套的分离纯化方案将其纯化出来。近十年来,分离纯化重组蛋白所常用的分离纯化技术有:柱层析,亲和层析,离子交换层析,凝胶过滤层析等。
(1)亲和层析:亲和层析有操作方便,回收率高的特点,并可使我们所需蛋白保持较高的活性,所以比较适合用于含量少且不稳定的生物活性物质。亲和层析是一种吸附层析,主要原理是将可与目的蛋白特异性结合的配体放置到载体中,当混合物经过载体时目的蛋白可以与配体特异性结合,故目的蛋白被留在载体中,而其他杂蛋白则会流出,然后使用自由配体分子或缓冲液使其冲出,从而达到解吸的效果[4]。
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