一、课题目的、研究内容
本课题旨在通过基因工程手段构建含抗CD20分子的Fab片段，通过摇瓶培养在毕赤酵母GS115中的表达出目的蛋白，分离纯化后利用酶促反应方法偶联毒性小分子化合物，研究其抗肿瘤活性，为肿瘤的治疗提供新的有效药物。
二、研究手段
通过PCR法获取编码抗CD20分子Fab的目的基因，与载体质粒连接后转入毕赤酵母细胞，甲醇诱导表达目的Fab片段，并通过亲和层析方法分离纯化，在Fab片段后连上LPETG标签，利用Sortase酶的催化作用，可将LPETG修饰后的Fab片段与G修饰的小分子化合物进行偶联，得到靶向CD20的具有杀伤效应的活性分子。再通过细胞水平的体外实验及动物水平的体内实验验证及评价其抗肿瘤活性。
三、主要成果形式
成功获得具有活性的Fab蛋白，偶联毒性小分子药物，检测其体外及体内抗肿瘤活性。
四、综述报告
一、ADC
抗体偶联药物（antibody-drug conjugates，ADC）是将对特异抗原具有亲和力的单克隆抗体或抗体片段与对靶细胞具有一定杀伤力的毒性小分子通过化学键或生物反应结合在一起，产生特异的抗肿瘤效应的一类药物。具有靶向性的抗体可直接针对肿瘤细胞，提高杀伤效率，同时减少毒性小分子的副反应。目前常用的细胞毒小分子药物主要有卡里奇霉素 (calicheamicin) 类，Auristatin 类和美登木素生物碱 (maytansinoid) 类【1】。
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